ガラス底35 mm培養皿(イワキガラス 3911-035)をコラーゲンにてコートする(*)。
COS1細胞を約50%程度に10% FBSを含むDMEMにて播きなおす。
FuGene6(Roche)にてpRaichu-124X 2 mgをトランスフェクトする。
6時間後、血清を含まないフェノールレッド不含MEM(ニッスイ)2mlに培地交換
12時間後、培地1 mlを別のチューブに保存する。
ここに、上皮細胞増殖因子を50 ng/mlになるように添加する。
細胞を顕微鏡上にうつし、観察する。

*Collagen Type I (Nitta gelatin)

  1. Dissolve stock solution to 1 mM HCl to obtain 0.1 % (w/v) collagen solution.
  2. Coat dishes with 0.25 ml/cm2. Incubate for 1 h at room temperature (in clean bench).
  3. Remove excess fluid from the coated surface, rinse with DDW twice, and dry the dishes.
  4. Keep the dishes dry until use.