シグナル伝達を可視化する技術(2015年6月23日):Q and A
- FRETは発光の強度と距離が比例するということですか?
A: 発光強度 I = R^6/(x^6 + R^6) ; x=距離、R=フェルスター距離。
- 蛍光タンパク質をどこに結合させるかでGタンパク質の機能が影響されることがありますか?
A: YES!
- SPREADが傷口では10倍速いように見えましたが?
A: 頻度は大きく上昇します。伝搬速度は変化しません。1.5 micrometer/min
- 会合する分子をFRETで検出する場合、蛍光タンパク質が反対側にくるとFRETはおきませんか?
A: その通り。二分子FRETの場合でも蛍光タンパク質をどこに結合させるかは大事です。
ただし、蛍光タンパク質は重合する性質があるので、ある程度の長さのリンカーを付ければ融合位置の影響はキャンセルされます。
- イメージング時の褪色はどのように防ぎますか
A: 酸素を少なくするという方法も知られています。しかし、原則は、照射光を少なくし、カメラの感度を上げることです。
- What is the disadvantage of FRET biosensors?
A: When you measure molecular activities, you always perturb them. Usually, the biosensors are expressed between 10^4 to 10^6 molecules/cell, which
is almost equal to thos of the signaling molecules. So, you will expect atteunation of signaling cascades by the introducing the probes.